Метод стерилізації агару та живильних середовищ для біотехнологічних досліджень в культурі in vitro

Анотація

Мета. Розробити метод стерилізації агару та живильних середовищ для розмноження та культивування in vitro рослинного матеріалу з використанням мікрохвильової печі (НВЧ-печі).

Методи. Лабораторні, біотехнологічні, фізіологічні, аналітичні.

Результати. В дослідженнях визначена можливість застосування мікрохвильової печі для стерилізації живильних середовищ та агару. Проаналізовано вплив умов стерилізації в мікрохвильовій печі (термін, режим та потужність мікрохвильового випромінювання) на якість живильних середовищ — стерильність, щільність, інфікування. Встановлено оптимальні умови стерилізації в мікрохвильовій печі: в постійному режимі 2–3 хвилини після закипання рідини (температура біля 100 ^оС) при 750–900 вт; у пульсуючому — 30 секунд при 750–900 вт + 1–2 хвилини при 500 вт + 30 секунд при 750–900 вт або 30 секунд + 30 секунд + 30 секунд при 900 вт, які забезпечують отримання стерильних якісних середовищ в короткі терміни. Тоді як в автоклавах стерилізацію агару та живильних середовищ проводять за температури, яка вища за 100 ^оС (130–140 ^оС) протягом 120 хвилин, що не забезпечує збереження біологічної цінності цукрів, вітамінів, регуляторів росту, амінокислот. За розробленим методом стерилізації було виготовлено більш 30 різних за складом живильних середовищ для мікроклонального розмноження міскантусу, отримання морфогенних калусів та ембріоїдів цукрових буряків за методом андрогенезу in vitro.

Висновки. Розроблено метод стерилізації живильних середовищ для розмноження та культивування in vitro рослинного матеріалу за допомогою їх термічної обробки з використанням мікрохвильової печі, який дозволяє приготування живильних середовищ в значно коротші терміни (2–3 хвилини), ніж при застосуванні автоклаву (120 хвилин) і забезпечує стерильність та збереження біологічної цінності органічних та мінеральних речовин та економічність процесу.